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            SILAC(定量蛋白質組學)的技術原理及特點

            更新時間:2023-03-07      瀏覽次數:4655
              技術原理:
             
              SILAC(定量蛋白質組學)的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩定同位素(重型)標記的必需氨基酸取代細胞培養基中相應氨基酸,細胞經5-6個倍增周期后,穩定同位素標記的氨基酸摻入到細胞新合成的蛋白質中替代了原有氨基酸。不同標記細胞的裂解蛋白按細胞數或蛋白量等比例混合,經分離、純化后進行質譜鑒定,根據一級質譜圖中兩個同位素型肽段的面積比較進行相對定量。屬于體內代謝標記法。
             
              技術特點:
             
              SILAC(定量蛋白質組學)是體內標記技術,穩定同位素標記的氨基酸與天然氨基酸化學性質基本相同,所標記的細胞和未標記細胞在生物學行為上沒有差異,標記效率可高達100%。
             
              SILAC(定量蛋白質組學)采用質譜定量,定量結果準確且批次變異小、重復性好。
             
              體內代謝標記與SDS-PAGE或色譜分離技術相結合,兼容疏水性蛋白和偏堿性蛋白,不受蛋白性質限制。
             
              多個樣品混合后同時進行分離、酶切和鑒定,后續實驗對樣品的影響一致,減少了實驗操作和儀器設備產生的影響。
             
              由于該SILAC(定量蛋白質組學)屬于體內標記,標記效果穩定,其標記效率不受裂解液的影響,不僅適合于進行  全細胞蛋白的分析,還適合于膜蛋白的鑒定和定量。
             
              SILAC(定量蛋白質組學)與化學標記相比,SILAC(定量蛋白質組學)方法蛋白需要量明顯減少,通常每個樣品只需要幾十微克的蛋白量。
             
              活體標記,更接近樣品真實狀態。
             
              SILAC(定量蛋白質組學)只適用于活體培養的細胞,對于生物醫學研究中常用的組織樣品,體液樣品等無法分析,對于動物模型的標記成本太大,無法實現。
            021-56570878
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